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熒光顯微鏡一次PCR反應(yīng)檢測(cè)到數(shù)種菌株的技巧




來(lái)源:責(zé)任編輯:yiyi
時(shí)間:2011-6-24 11:10:21

熒光顯微鏡一次PCR反應(yīng)檢測(cè)到數(shù)種菌株的技巧
一般來(lái)說(shuō)3-4重PCR要考慮的因素非常多,一句話:難上加難

第一種方法:
理想化的模型,必須基于以下特點(diǎn):

1)2-3個(gè)待測(cè)試菌株有合適區(qū)域設(shè)計(jì)的通用引物
2)在上下游引物之間的順序需有差異,而且差異需有各自特異性探針的設(shè)計(jì)。
      想一次同時(shí)操作,需要設(shè)計(jì)出來(lái)的2-3條探針的TM值,需等于且高出引物5-10度,
       其中難度非常大但是也不是不可能

第二種方法:

操作性會(huì)可操作些。但是需要細(xì)心和細(xì)致,需要用目的菌基因模板,
用一樣的引物和探針設(shè)計(jì)原則(Primer Express設(shè)置除擴(kuò)增長(zhǎng)度外,其他的必須是相似參數(shù))

 

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